Immunológiai gyakorlatok

Kézirat

Szerző

Erdei Anna

Rajnavölgyi Éva

Sármay Gabriella

Budapest

'Erdei Anna: Immunológiai gyakorlatok ' összes példány

Kiadó:	Tankönyvkiadó Vállalat
Kiadás helye:	Budapest
Kiadás éve:	1986
Kötés típusa:	Ragasztott papírkötés
Oldalszám:	195 oldal
Sorozatcím:
Kötetszám:
Nyelv:	Magyar
Méret:	24 cm x 17 cm
ISBN:
Megjegyzés:	Fekete-fehér ábrákkal illusztrálva. Tankönyvi szám:J3-1325

Értesítőt kérek a kiadóról

A beállítást mentettük,
naponta értesítjük a beérkező friss
kiadványokról

Tartalom

Immunizálás - Ellenanyag-termelés	5
Gyakorlatok	8
Nyulak immunizálása fehérjeantigénekkel	8
Patkány immunizálása szarvasmarha-vörösvérsejtekkel	10
Egerek immunizálása haptén-egérszérumalbumin (MSA) konjugátummal	10
Az immunglobulinok izolálása
IgG preparálása szérumból kisózással, majd ezt követő ioncserélő kromatográfiával	13
Kisózás	13
Ioncserélő kromatográfia	14
A teljes szérum molekulatömeg szerinti frakcionálása	15
IgM preparálása bórsavas kicsapással	15
Gyakorlatok	16
IgG-preparálás normál humán vagy nyulszérumból kisózással, majd ezt követő ioncserélő kromatográfiával	16
Teljes humán vagy nyulsavó frakcionálása Sephadex G-200 oszlopon, az IgM- és az IgG-tartalmú frakciók elkülönítése	18
IgM izolálása normál humán és monoklonális IgM-et tartalmazó szérumból bőrsavas kicsapással	19
Az immunglobulin-fragmentumok izolálása	21
Az immunglobulinok polipeptidláncainak elválasztása és újra-összekapcsolása	22
7S IgM-alegységek előállítása polimer IgM-ből	23
Az IgG-molekula enzimatikus hasítása	24
Gyakorlatok	27
Humán monoklonális IgG H-és L-láncának szétválasztása és az izolált láncok autológ összekapcsolása	27
Humán monoklonális 19 S IgM enyhe redukciója és 7S IgM-alegységek előállítása	29
Normál humán vagy nyul IgG pepszines hasítása	29
Humán monoklonális IgG1 és IgG2 nyelomafehérjék papainos hasítása, Fab- és Fc-fragmentumok előállítása	32
Humán IgG tripszines hasítása	34
Az elsődleges antigén-ellenanyag kapcsolodáson alapuló módszerek (jelzéses technikák)	37
A módszerek alaptípusai	38
Direkt módszer	39
Kompetetív módszer	41
Indirekt módszer	41
Kettős ellenanyag "sandwich" módszer	44
A leggyakrabban alkalmazott jelzési módszerek	46
Szilárd fázisu RIA- és EIA-módszerek	46
Fehérjék jelölése	48
Oldott antigén vagy ellenanyag szilárd fázishoz kötése	49
Sejtek kitapasztása PVC vagy polisztirol alapanyagú szilárd felületre sejtfelszíni antigének RIA- vagy EIA-módszerrel történő kimutatása céljából	50
Az antigén-ellenanyag kapcsolódáson alapuló lépések	50
A reagensek feleslegének eltávolítása	51
A RIA- és az EIA-módszerek értékelése	51
Farr-módszer	53
Bakteriofág-inaktivációs vizsgálat	55
Biotin-avidin vagy haptén-ellenanyag reakción alapuló indirekt jelzéses módszerek	56
Gyakorlatok	57
Immunszorbens módszerek	62
Gyakorlatok	66
Anti-ovalbumin aktivitásu specifikus ellenanyag izolálása ovalbumint hordozó antigénszorbens-oszlopon	66
Ismeretlen, több komponensű oldat BSA-tartalmának eltávolítása glutáraldehiddel polimerizált, anti-BSA aktivitású immunszérummal	71
Egér-IgG-alosztályok izolálása bróm-ciánnal aktivált Sepharose 4B-hez kötött SpA-immunszorbens oszlopon	72
Az antigén-ellenanyag kapcsolódást követő másodlagos kölcsönhatásokon (szerológiai reakciókon) alapuló módszerek	74
Precipitáció	75
Kvantitatív precipitációs görbe felvétele	76
Agargél közegben végzett precipitációs (immundiffuziós) módszerek	83
Immunelektroforézis	84
Elektroimmundiffuzió (Laurell-módszer, rocket-elektroforézis)	86
Gyakorlatok	86
Agglutináció	95
Gyakorlatok	98
Haptének és szolubilis antigének kapcsolása vörösvérsejtek felületére	98
Hapténellenes ellenanyagok titerének meghatározása direkt és indirekt passzív hemegglutinációs módszerrel	101
Az agglutináció gátlás vizsgálata	102
Inkomplett anti-D aktivitású emberi ellenanyagok kimutatása és az anti-D aktivitású szérum titerének meghatározása indirekt agglutinációval	102
A komplementrendszer	104
A komplementrendszer működésének vizsgálata	104
Összkomploment-titrálás	105
Az alternatív úton történő komplementaktiválás mérése	106
A C1q-kötés vizsgálata	107
A komplementrendszer aktivitásán alapuló módszerek	108
Komplementkonszumpciós vizsgálat	108
Komplementfüggő sejtoldódás (citotoxicitás)	109
Gyakorlatok	110
Normál emberi szérum összkomploment-tartalmának meghatározása összkomploment-titrálással	112
Különböző összetételű ovalbumin-antiovalbumin immunkomplexek komplementaktiváló képességének meghatározása komplementkonszumpciós vizsgálattal	114
Bakteriális lipopoliszacharid (LPS) alternatív úton történő komplementaktiváló képességének mérése	114
Ovalbumin-antiovalbumin immunkomplexek C1q-követő képességének vizsgálata	115
Anti-limfocita savó (ALS) titerének meghatározása mikrocitotoxicitási vizsgálattal	118
Immunkompetens sejtek preparálása	120
Perifériás mononukleáris sejtek (PMNS) szeparálása vérből	120
Egérlépsejt-szuszpenzió készítése	121
Monociták, granulociták és makrofágok eltávolítása sejtszuszpenzióból	122
A fagocitáló sejtek eltávolítása vaspor segítségével	123
A monociták és a granulociták eltávolítása kitapasztással	123
A szeparált sejtek festése és számolása	123
Az élő sejtek számának meghatározása kristályibolyafestéssel	124
Az elpusztult sejtek arányának meghatározása tripánkék-festéssel	124
Limfocitapopulációk és -szubpopulációk szeparálása	126
Egér T- és B-limfociták szeparálása nylonvatta oszlopon	126
Sejtpopuláció izolálása monolayar-technikával	127
Monocitapreparálás emberi vérből	128
Egér hasüregéből származó (peritoneális) makrofágok preparálása	129
A limfociták sejtfelszíni strukturáinak vizsgálata	131
Fehérjék jelölése fluoreszcein-izotiocianáttal (FITC)	132
Sejtfelszíni immunglobulinok (sIg) kimutatása B-sejteken fluoreszcein-izotiocianáttal (FITC) jelölt ellenanyagok segítségével	134
Direkt fluoreszcens teszt	135
Indirekt fluroeszcens teszt	136
Limfocitamembrán-molekulák mobilitásának vizsgálata immunfluoreszcens módszerrel	136
T-limfociták rozettaképzése birkavörösvérsejtekkel (E-rozetta)	138
IgG-Fc receptort hordozó sejtek kimutatása ellenanyaggal fedett vörösvérsejtek segítségével (EA-rozetta)	140
C3-receptort (C3R) hordozó sejtek kimutatása IgM ellenanyaghoz kapcsolódó komplementtel fedett vörösvérsejtek segítségével (EAC-rozetta)	142
Emberi limfociták HLA-ABC tipizálása limfocita-mikrocitotoxicitás módszerrel	143
Emberi PMNS-ek Fc-receptorainak szeparálása sejtmembránból	145
Immunkompetens sejtek funkcionális aktivitásának mérése	147
Limfociták blasztos transzformációja	147
Az ellenanyag-termelő sejtek kimutatása	151
Egérlépsejtek in vitro immunizálása a Michell-Dutton-féle rendszerben	153
IgM-osztályú anti-szarvasmarha-vörösvérsejt ellenanyag termelés kimutatása direkt plakkképzés módszerrel	154
Anti-szarvasmarhavörösvérsejt ellenanyagok kimutatása plazmasejtekben intracelluláris fluoreszcencia módszerrel	155
Szenzitizált T-limfociták által közvetített citrotoxikus reakció	156
Természetes citrotoxicitás mérése in vitro	159
Ellenanyag közvetítette citrotoxikus reakció (ADCC)	160
Emberi monociták és egérből származó peritoneális makrofágok fagocitózisa	162
Emberi monociták opszonikus (EA) fagocitózisa	163
Egérből származó peritoneális makrofágok opszonikus (C3bR mediálta) fagocitózisa	163
Leukocitamigráció-gátlás vizsgálata	165
Függelék	167
Az immunológiai gyakorlatban alkalmazott biokémiai módszerek	167
Fehérjemeghatározásai módszerek	170
Kis molekulatömegű anyagok (pl.: sók) eltávolítása dialízissel	171
Fehérjeoldatok tárolása	172
Ioncserélő kromatográfia	172
Gélszűrés	174
Affinitáskromatográfia	175
Elektroforézis	175
Pufferoldatok	178
Festékek	183
Limfociták tenyésztéséhez szükséges médiumok	184
Felhasznált irodalom	185
Rövidítések	187