Hisztotechnikai és hisztokémiai laboratóriumi praktikum

Tartalom

ÁLTALÁNOS LABORATÓRIUMI ISMERETEK
I. A laboratoriumi üvegedények tisztítása 17
II. Mérleg, és mérés... . 19
1. Táramérleg 19
2. Gyors táramérleg 20
3. Analitikai mérleg 21
4. Egyenlőtlen karú analitikai mérleg 28
III. Oldatok, oldatkészités 31
IV. Fizikai vizsgáló módszerek 32
1. Fajsúly, sűrűség, folyadékok fajsulyának mérése 32
2. Centrifugálás 35
3. Kolorimetria 36
4. Spektrofotométerek 38
V. Puffer oldatok, pH mérés 43
1. Alapfogalmak 43
2. Puffer oldatok készitése 44
3. pH mérés 46
a/ Kolorimetriás pH meghatározás 46
b/ Elektrometrikus pH meghatározás 47
HISZTOTECHNIKA
I. Fixálás 51
1. Formalin fixálás 51
2. 10 %-os neutrális formaiin hisztokémiaivizsgálatokhoz. 51
3. Kalcium-formol zsirfestéshez 52
4. Fixálók glikogén kimutatására 52
a/Cukorral telitett alkohol 52
b/ Pikrinsavas alkohol 53
5. Savanyu alkohol szulfhidril csoportok kimutatásához 53
6. Ozmiumtetroxidos fixáló zsirok kimutatására 53
7. Carnoy-f. fixáló keverék 54
8. Susa rögzitő keverék 54
9. Zenker-f. fixáló keverék 55
10. Cetil-pridines fixáló keverék 55
II. Dekalcinálás 56
1. Savas dekalcinálás 56
2. EDTA-s dekalcináló ezimhisztokémiai vizsgálatokhoz 56
3. Citromsavas dekalcinálók 57
a/ Citromsav - sósav elegy 57
b/ Citrát - hangyasav dekalcináló elegy 58
4. Elektromos dekalcinálás 58
III. Beágyazás 59
1. Paraffin beágyazás 59
2. Metilbenzoát - celloidin sorozat 60
3« Celloidin beágyazás 61
Hideg beágyazás enzimreakciókhoz 62
5. Carbowax beágyazás 63
IV. Metszés 65
1. Paraffin block metszése 65
2. Celloidin block metszése 66
3. Carbowaxba ágyazott anyagok metszése 67
Fagyasztott metszetek készitése 68
a/ Fixált fagyasztott metszet készitése 68
b/ Friss fagyasztott metszet készitése 68
5. Metszés kriosztáton 69
6. Fagyasztásos száritásos eljárás 70
V. Metszetek lefedése 72
1. Lefedés kanadabalzsammal 72
2. Lefedés polivinilacetát oldattal 72
3. Lefedés vizből glicerinnel 73
4. Lefedés glicerin-zselatinnal 73
VI. Festési eljárások 75
Általános tudnivalók 75
1. Haematoxilin eozin festés 76
2. Haemalaun eozin festés 78
3. Erlich-f. haematoxilin 79
4. Farkas - Mallory-f. festés 79
5. Foszforwolfrámsavas Mallory-f. haematoxilin 81
6. Azán festés 82
7. Endes-f. trikróm festés 84
8. Weigert-f. fibrin festés 85
9. Yan-Gieson-f. festési eljárás 87
10. Rugalmas rost festés orceinnel 87
11. Rugalmas rost festés rezorcin-fuchsinnal 88
12. Argirofil rostok impregnálása 89
a/ Gömöri-f. ezüstimpregnáció 89
b/ Foot-f. ezüstimpregnáció 91
c/ Bielschowsky-f. block impregnálás 92
13. Amyloid kimutatása genciána ibolyával 93
14. Amyloid festés Sirius Red-el 94
15. Amyloid kimutatása thyoflavin T-vel 95
16. Amyloid kimutatása kongó vörössel 96
17. Gömöri-f. krómhaematoxilin 96
18. Hypophysis festés kongó vörössel 98
19. Schmorl-f. festés 98
20. Azán festés csontszövetből 99
21. Mucin és mukoidok kimutatása mucikarminnal 99
22. Koch bacillus kimutatása 100
23. Grahm festés 101
CYTODIAGNOSTIKA
I. A cytologiai vizsgálatok technikája 105
1. Kenetkészités 105
2. Fixálás 105
II. A cytologiai kenetek festése 107
1. Papanicolaou festés 107
2. Haematoxilin-eosin festés 110
3. Giemsa, illetve May-Grünwald-Giemsa festés 111
4. Acridin-orange festés 111
III. Néhány speciális cytodiagnostikai eljárás 113
1. Köpet cytologiai vizsgálata 113
2. Gyomormosó folyadék cytologiai vizsgálata 113
3. Vizelet-üledék cytologiai vizsgálata 113
4. Prostata-váladék cytologiai vizsgálata 114
5. Nyirokcsomó cytologiai vizsgálata 114
6. Folyadékgyülemek /punctatumok/ cytologiai vizsgálata 115
HISZIOKÉMIA
I. Fehérjék hisztokémiája 119
1. Általános fehérje reakció 119
2. Alloxán - Schiff reakció 120
3. Millon reakció 120
4. Sakaguchi reakció 121
5. DDD reakció - SH csoportok kimutatására 123
II. Immunhisztokémiai vizsgálatok 125
1. Gamma globulin frakcionálása 126
2. Anti-humán gamma globulin jelzése FITC-el 127
3. San Marie-f. beágyazási módszer immunhisztokémiai
vizsgálatokhoz 130
4. Immunhisztokémiai reakció fluoreszcensekkel jelzett anti-humán gamma globulinnal 130
5. Anti-nukleáris faktor vizsgálata indirekt módszerül 132
III. Polysaccharidok hisztokémiája 134
1. PAS reakció 2.34
2. Glykogén kimutatása PAS reakcióval 133
3. Glykogén és mucin kimutatása ezüstimpregnálással. 135
4. Savanyu mucopolysaccharidok kimutatása Hale
reakcióval 137
5. Metakromáziás festés kresylibolyával 133
6. Metakromáziás festés toluidinkék oldattal 139
7. Metilélkék extinkció 149
8. Ion asszosziációs eljárás polyanionok kimutatására 141
9. Ion asszosziáció és C.E.C. metódus 143
10. Aldehidfuchsin a szulfát és karboxil csoportok
kimutatására 144
11. Alefán-kék - PAS reakció 145
12. Szulfatált mycopolysaccharidák kimutatása 146
a/ Alacsony koncentrációjú ferri-diamin-alciánkék oldat 146
b/ Nagykoncentracióju ferri-diamin-alciánkék oldat 147
13. Alciánkék, alciánsárga festés mucopolysaccharidok kimutatására 148
14. Szulfatált mucopolysaccharidok kimutatása
acriflavinnal 149
IV. Nukleinsavak kimutatása. 151
1. Feulgen reakció 151
2. Metil-zöld - pyronin festés 152
3. Metil-zöld - pyronin festés DNA és RNA kimutatására 155
4. Gallocianin - krómtimsós eljárás 154
5. DNS és RNS elkiilönitése enzim emésztéssel 155
V. Enzim hisztokémia 156
1. Alkalikus foszfatáz kimutatása Gömöri szerint.. 157
2. Acid foszfatáz kimutatása Gömöri szerint 158
3. Tween módszer lipázok kimutatására 160
4. Glükóz - 6 - foszfatáz kimutatása 160
5. 5a Nukleotidáz kimutatása 161
6. Ca++ igényes ATP-áz kimutatása 163
7. K+, Na+ igényes ATP-áz kimutatása 164
Naftol-észterek szintézise 165
a/ Naftol-acetát előállitása 165
V Naftol-foszfát előállitása 166
c/ A szintézisek ellenőrzése 167
8. Alkalikus foszfatáz kimutatása azokötéses reakcióval 169
9. Acid foszfatáz kimutatása Barka-f. hexazotált
fuchsinnal 169
10. Nem specifikus észteráz kimutatása 170
11. Cholinészteráz kimutatása 171
12. Aminopeptidáz kimutatása 172
13. Egyéb azokötéssel végzendő reakciók 173
Hidrolitikus enzimek kimutatására szolgáló
egyéb szubszbrátumok 173
14. Foszforiláz kimutatása 174
15. Branching enzim kimutatasa 175
16. UDPG-transzferáz kimutatása 176
17. Szukcinodehidrogenáz kimutatása 177
19. Diaforáz kimutatása 182
20. Glutamát dehidrogenáz kimutatása 183
21. Citokróm C oxidáz kimutatása Na-di reakció 184
22. Citokróm C oxidáz kimutatása 185
23. Citokróm C oxidáz kimutatása tetrazolium sóval. 185
24. Monoamino-oxidáz kimutatása 186
23. Izo-enzimek kimutatása hisztokémiai módszerekkel 187
26. Peroxidáz kimutatása benzidin segítségével 188
27. Peroxidáz kimutatása leukofestékes módszerrel.. I89
28. Tirozináz /DOPA oxidáz/ kimutatása 190
29. Ubiquinon hisztokémiai kimutatása 191
VI. Zsirok kimutatása 192
1. Sudan III festés 192
2. Festés Sudan IV. oldattal 193
3. Festés Sudan black B oldattal 193
4. Zsirfestés Niluskék-szulfáttal 194
5. Zsirok kimutatása Oil red O-val 193
6. OTAIm reakció foszfolipidek kimutatására 195
7. Acetálfoszfatidák kimutatása 195
8. Cholesterin kimutatása 198
VII. Pigmentek 199
1. Formalin pigment eltávolítása 199
2. Haemosiderin pigment kimutatása 199
3. Bilirubin kimutatása 199
4. Melanin pigment kimutatása 200
5. Lipofuszcin kimutatása 200
6. Krómtimsós haematoxilin lipofuszcin kimutatására 201
VIII. Szervetlen és szerves anyagok kimutatása 202
1. Ferro ionok kimutatása 202
2. Ferri ionok kimutatása 20J
3. Kalcium ionok kimutatása alizarin rend S-el 203
4. Kalciumfoszfát kimutatása Kossá módszerével 204
5. Hugysav és urát kristályok kimutatása 205
IX. Blockolási eljárások 207
1. Acetilálás 207
2. Benzoilezés 208
3. Dezaminálás 208
4. Szulfatálási reakció 209
5. Metilálás 209
6. Aldehid csoportok blockolása 210
7. Szulfhidril csoportok blockolása 211
X. Enzimes emésztések 213
1. Diasztáz emésztés 213
2. Hyaluronidáz emésztés 214
3. Ribonukleáz emésztés 216
4. Dezoxiribonukleáz emésztés 216
5. Tripszin emésztés 217
6. Pepszin emésztés 218
XI. Polarizációs mikroszkópos vizsgálatok 220
1. Anilin reakció 220
2. Fenol reakció 221
3. Rivanol reakció 221
4. Rivanol reakció sejtmagra 222
5. Metakromáziás festés 223
6. Metakromáziás festés sejtmagra 223
FÜGGELÉK
Puffer oldatok 227
Mólsuly táblázat 235
Koncentrált savak néhány adata 237

Témakörök