A fehérjeanalitikai alapmódszerek alkalmazási területe (Dr. Kerese István) | 11 |
A fehérjeanalitikai munkák általános ismertetése | 12 |
Előkészítő munkák | 12 |
Elválasztástechnikai munkák | 14 |
Meghatározási munkák | 15 |
Metodikai példák | 17 |
Irodalom | 22 |
Általános laborítóriumi módszerek (Dr. Gáspár László) | 24 |
Általános laboratóriumi munkák a vizsgálati anyagok előkészítésére | 24 |
Mintavétel | 24 |
A minták homogenizálása | 27 |
Száraz, szilárd anyagok aprításának eszközei | 27 |
Nedves, szilárd anyagok aprításának eszközei | 28 |
A vizsgálati anyag koncentrálása és szárítása | 29 |
Koncentrálás és szárítás vákuumbepárlással | 29 |
Szárítás liofilizálással | 33 |
Fehérjeoldatok készítése | 36 |
Szöveti fehérjék kioldása | 36 |
Szöveti fehérjék kisajtolása | 38 |
Fehérjeoldatok szűrése, koncentrálása szűréssel | 38 |
Szűrés és szűrők | 38 |
Ultraszűrés | 40 |
Kis molekulasúlyú anyagok szűrése dialízissel, elektrodaialízissel | 40 |
Centrifugálás és centrifugák | 44 |
A fehérjeanalitikai laborítórium egyéb fontos eszközei | 46 |
Meghatározások a vizsgálati anyagok általános jellemzésére | 48 |
Szárazanyag-tartalom meghatározása | 48 |
Hamutartalom meghatározása | 51 |
Zsírtartalom meghatározása | 51 |
Nitrogéntartalom meghatározása Kjeldahl-módszerrel | 52 |
A Kjeldahl-féle roncsolás | 52 |
A roncsolásban képződött ammónia meghatározása titrálással | 57 |
A roncsolásban képződött ammónia meghatározása fotometriásan | 60 |
Nitrogéntartalom meghatározása égetéssel | 64 |
A vizsgálati anyag nemfehérje-nitrogén (NPN) tartalmának meghatározása | 65 |
Fehérjemeghatározási módszerek | 65 |
Spektrofotometriás eljárások ultraibolya tartományban | 66 |
Spektrofotometriás és kolorimetriás eljárások a látható fény tartományában | 67 |
Fehérjemeghatározások festékkötődéssel | 70 |
Turbidimetiás eljárások | 71 |
Fluorometriás eljárások | 72 |
Refraktometriás eljárások | 73 |
Polarimetriás eljárások | 73 |
Általános jellegű irodalom | 74 |
Irodalom | 74 |
Elektroforézis (Dr. Takács Ödön) | 77 |
Az elektroforézis alapjai, az elektroforézis metodikai formái | 77 |
A poliakrilamid-gél elektroforézis (PAGE) | 79 |
A PAGE alapjai | 79 |
A PAGE vegyi anyagai | 82 |
Az akrilamid és biszakrilamid | 82 |
Katalizátorok | 82 |
Detergensek | 82 |
Pufferoldatok | 83 |
A PAGE analitikai alkalmazása | 84 |
Analitikai készülékek | 84 |
A gél készítése | 85 |
Gélpálcák készítése | 91 |
Géllapok készítése | 93 |
A fehérjeminta készítése és gélre vitele | 94 |
A gél-elektroforézis folyamata | 95 |
A gél kivétele elektroforézis után | 96 |
A gél fixálása, festése és mosása | 96 |
A leggyakrabban használt festési módszerek | 98 |
Specifikus festések | 99 |
A proteinogram kiértékelése | 100 |
Direkt-értékelés UV-fényben | 100 |
Fluorometriás kiértékelés | 101 |
Festett proteinogramok kiértékelése | 101 |
A gél frakcionálása | 101 |
A gélek megőrzése, tárolása | 102 |
Az egydimenziós elektroforetogramok interpretálása | 102 |
Speciális PAGE-alkalmazások | 103 |
Gradiens PAGE | 103 |
A detergens Page alkalmazása molekulasúly-meghatározáshoz | 103 |
Radioizotopokkal jelzett, fehérjéket tartalmazó gél nukleáris feldolgozása | 106 |
Enzimek specifikus kimutatása | 106 |
Immunológiai alkalmazások | 107 |
Kétdimenziós elválasztások | 107 |
Mikro-disc-elektroforézis | 108 |
Preparatív módszerek fehérjefrakciók kinyerésére | 109 |
A PAGE alkalmazása és eredményei | 109 |
A PAGE alkalmazása a biokémiai kutatásban | 109 |
A PAGE alkalmazása az élelmiszer- és takarmányfehérje-kutatásban | 110 |
A PAGE klinikai-kémiai alkalmazása | 113 |
Az izoelektromos fokuszálás | 114 |
Elektrofókuszálás oszlopmódszerrel | 115 |
Szacharóz gradiens | 115 |
Izoelektromos fokuszálás poliakrilamid-gélben | 115 |
Elelktrofokuszálás géllapon és vékonyrétegen | 116 |
Izotachoforézis | 117 |
Irodalom | 119 |
Oszlopkromatográfiás módszerek (Dr. Kerese István) | 123 |
Fehérjék és peptidek oszlopkromatográfiája | 124 |
Adszorpciós oszlopkromatográfia és alkalmazási területe | 124 |
Megoszlásos oszlopkromatográfia és alkalmazási területe | 126 |
Az ioncserés oszlopkromatográfia és alkalmazási területe | 127 |
Kromatografálások ioncserélő műgyantákkal | 128 |
Kromatografálások cellulóz alapú ioncserélőkkel | 133 |
Kromatografálások ioncserélő gélekkel | 139 |
Egyéb kromatográfiás módszerek | 140 |
Aminosavak oszlopkromatográfiája | 143 |
A vizsgálati anyag előkészítése kromatografáláshoz | 144 |
A minta hidrolizálása | 144 |
Savas hidrolízis | 145 |
Lúgos hidrolízis | 150 |
A deproteinizálás | 152 |
Aminosavak oszlopkromatografálása | 154 |
A kromatografálás technikai feltételei | 155 |
A gyantaoszlop | 155 |
A pufferoldatok készítése | 157 |
A ninhidrinoldat készítése | 158 |
Az analizátor | 160 |
A kromatografálás | 161 |
A kromatogramok értékelése | 172 |
Speciális kromatográfiás metodikák | 172 |
Az aminosavak ioncserés oszlopkromatográfiájának fejlődési irányai | 175 |
Irodalom | 177 |
Gélkromatográfia (Dr. Kalász Huba) | 183 |
A gélkromatográfia alapjai | 183 |
Gélek, géltípusok és jellemzőik | 184 |
A kromatográfiás műveletekhez használt gélek ismertetése | 185 |
Gélkromatográfiás készülékek és használatuk | 194 |
Gélkromatográfiás számítások | 199 |
Elméleti tányérszám és szeparálódás | 203 |
Gélkromatográfiás kísérletek előkészítése és metodikája | 205 |
A gél előkészítése | 205 |
A gélkromatográfiás oszlop töltése | 205 |
A gél szennyeződésének elkerülése, a szennyezett gél tisztítása | 206 |
Az oszlop és a minta méretei | 206 |
Reciklizációs gélkromatográfia | 208 |
A minta térfogatának hatása a szeparálásra | 213 |
A gélkromatográfia alkalmazásának fő területei | 215 |
Gélkromatográfiás molekulasúly-mérés | 215 |
Kötődési - komplexképződési folyamatok vizsgálata | 220 |
Preparatív csoportszeparálások | 222 |
Preparatív frakcionálások | 223 |
Peptidek gélkromatográfiás tisztítása | 233 |
Aminosavak gélkromatográfiája | 233 |
Egyéb gélkromatográfiás eljárások | 238 |
Gélkromatográfia szerves oldószerben | 238 |
Zónakicsapásos eljárás | 239 |
Centrifugálásos eljárások | 239 |
Ioncserés gélkromatográfia | 240 |
Affinitási gélkromatográfia | 240 |
Irodalom | 243 |
Fehérjék, peptidek és aminosavak rétegkromatográfiája (Tyihák Ernő) | 244 |
A rétegkromatográfia technikája | 244 |
Fehérjék rétegkromatográfiája | 248 |
Fehérjék elválasztása gélrétegen | 248 |
Fehérjék elválasztásának lehetőségei szerves és szervetlen alapanyagú rétegen | 253 |
A peptidek és peptidszármazékok rétegkromatográfiája | 255 |
Peptidek elválasztása szervetlen és szerves alapanyagú rétegen | 255 |
A peptidek elektrokromatográfiája | 259 |
Peptidek és peptidszármazékok kimutatási reakciói | 260 |
Aminosavak és rokonvegyületek rétegkromatográfiája | 263 |
Elválasztás szervetlen alapanyagú rétegen | 263 |
Aminosavak elválasztása cellulózrétegen | 268 |
Aminosavak elválasztása ioncserélő rétegen | 269 |
Aminosavak elválasztása zsugorított (színterelt) szilikagélrétegen | 273 |
Aminosavak elektrokromatográfiája | 274 |
Aminosavak kimutatása rétegkromatogramokon | 275 |
Szilikagél alapú rétegek | 275 |
Cellulóz alapú rétegek | 276 |
Ioncserélő gyantát tartalmazó rétegek | 276 |
Aminosavak színreakciói ninhidrinnel | 276 |
Az aminosavak félkvantitatív és mennyiségi meghatározása | 277 |
A rétegkromatográfia felhasználása peptidek és fehérjék szekvencia-analíziséhez | 280 |
2,4-dinitro-fenil (DNF)-aminosavak vizsgálata | 280 |
A danzil (Dns)-, pizil- és banzil-aminosavak rétegkromatográfiás vizsgálata | 285 |
A fenil-tiohidantoin (PTH)-aminosavak rétegkromatográfiája | 289 |
Irodalom | 292 |