Biokémiai laboratóriumi gyakorlatok

Tartalom

BEVEZETÉS
1. SZÉNHIDRÁTOK I. A MONOSZACHARIDOK REAKCIÓI 3
1.1. A MONOSZACHARIDOK KIMUTATÁSA 3
1.1.1. MOLlSCH-reakció 3
1.2. A SZÉNATOMSZÁM MEGÁLLAPÍTÁSA 6
1.2.1. TAUBER-próba 6
1.2.2. BIAL-próba 8
1.3. ALDÓZOK ÉS KETÓZOK MEGKÜLÖNBÖZTETÉSE 11
1.3.1. SELlWANOFF-reakció 11
1.4. A MONOSZACHARIDOK ÉS A DISZACHARIDOK MEGKÜLÖNBÖZTETÉSE 14
1.4.1. BARFOED-reakció 14
1.5. A CUKROK REDUKÁLÓ JELLEGE 16
1.5.1. FEHLlNG-rerakció 16
1.5.2. BENEDlCT-reakció 18
1.5.3. TOLLENS-rerakció (Ezüsttükör-próba) 20
1.6. A PRÓBÁK ÉRTÉKELÉSE 23
1.7. ISMERETLEN MONO-ÉS DISZACHARIDOK KIMUTATÁSA ÉS MEGHATÁROZÁSA 24
1.8. CUKORTARTALMÚ NÖVÉNYI KIVONAT KÉSZÍTÉSE 28
2. SZÉNHIDRÁTOK II. 30
POLISZACHARIDOK LEBONTÁSÁNAK VIZSGÁLATA
2.1. A KEMÉNYÍTŐ ENZIMATIKUS HIDROLÍZISE 32
2.2. AZ AMILÁZ ÉS SZACHARÁZ ENZIMEK SPECIFIKUSSÁGA 36
2.3. A KEMÉNYÍTŐ SAVAS HIDROLÍZISE 38
3. FEHÉRJÉK VIZSGÁLAT OLDATBAN 40
3.1. FEHÉRJÉK REVERZÍBILIS KICSAPÁSA KISÓZÁSSAL 42
3.2. FEHÉRJÉK IRREVERZÍBILIS KICSAPÁSA 46
3.2.1 Fehérjék kicsapása nehézfémsókkal 46
3.2.2. Fehérjék kicsapása ásványi savakkal 48
3.2.3. A fehérjék kicsapása szerves savakkal 49
3.3. A fehérjék kvalitatív színreakciói 50
3.3.1. Biuret-reakció 50
3.3.2. Xantoprotein-reakció 52
3.3.3. MlLLON-reakció
3.3.4. ADAMKiEWiCH-reakdó 54
3.3.5. SAKAGUCHl-reakció 55
3.3.6. Fehérjék kéntartalmának kimutatása 56
3.3.7. Egyéb aminosav-reakciók 57
3.4. AZ AMINOSAVAK KVANTITATÍV REAKCIÓI 58
3.4.1. VAN SLYKE-reakció 58
3.4.2. Ninhidrin-reakció 59
4. LIPIDEK VIZSGÁLATA 61
4.1. A telítetlen zsírsavak kimutatása 63
4.2. Szabad zsírsavak mennyiségének meghatározása 65
4.3. A lipidösszetétel hatása a membránok permeábilitására 68
4.4. Lecitin kimutatása tojássárgájából 70
4.5. SZTEROIDOK 71
4.5.1. A koleszterin kimutatása 76
4.5.2. A kólsav kimutatása 78
4.6. Epefestékek 79
5. AZ ENZIMMŰKÖDÉST BEFOLYÁSOLÓ TÉNYEZŐK I. 81
5.1. A hőmérséklet hatása az enzimes reakciókra 81
5.2. A pH hatása a nyálamiláz működésére 84
5.3. Az enzimatikus reakciók aktiválása és gátlása 86
6. AZ ENZIMMŰKÖDÉST BEFOLYÁSOLÓ TÉNYEZŐK II. 88
6.1. A tejzsír bontása hasnyálmirigyből származó lipázzal 88
7. ENZIMEK AKTIVITÁSA 91
7.1. a-amiláz aktivitásának meghatározása 91
7.2. GOT aktivitásának meghatározása kapcsolt optikai teszttel 95
7.3. GPT aktivitásának meghatározása kapcsolt optikai teszttel 101
7.4. LDH aktivitásának meghatározása optikai teszttel 107
8. ENZIMATIKUS ANALÍZISEK 111
8.1. Glükózkoncentráció meghatározása GOD-POD enzimrendszerrel 112
8.2. Tejsav meghatározása optikai teszttel 116
8.3 Karbamid meghatározása vérszérumból enzimatikus,
kolorimetriás módszerrel 120
8.4. Koleszterin meghatározása CHOD-POD módszerrel 124
8.5. Húgysav meghatározása uríkáz-peroxidáz enzimrendszerrel 128
9. KETONTESTEK KIMUTATÁSA 132
9.1. Ketontestek kimutatása vizeletben 133
9.2. Acetecetsav kimutatása vizeletben 135
10. NUKLEINSAVAK VIZSGÁLATA I. 136
10.1. RNS kinyerése sertésmájból és lépből detergens-kezeléssel 136
10.2. Lép, máj és szív RNS-tartalmának meghatározása 139
10.3. Májszövet, lép és szív DNS-tartalmának meghatározása 143
10.4. Májszövet DNS-és RNS-tartalmának vizsgálata 147

Témakörök