Előszó az első kiadáshoz | 9 |
Előszó a második kiadáshoz | 10 |
A fehérjevizsgáló módszerek néhány metodikai kérdésre | 11 |
A) Natív fehérjék vizsgálata | 11 |
Natív fehérjék elektroforézise | 12 |
Zóna-elektroforetikus módszer | 14 |
Natív fehérjék vizsgálata immunokémiai módszerekkel | 19 |
Fehérjék ioncserélő kromatográfiája | 25 |
Fehérjék frakcionálása gélszűréssel | 27 |
Elektroforetikus és immunokémiai módszerek a vérsavó fehérjéinek vizsgálatában | 29 |
B) A szekvenciaanaltika metodikai kérdései | 37 |
Fehérjék vizsgálata kisfeszültségű elektroforézissel | 51 |
A) Kisfeszültségű papír-elektroforézis | 51 |
Az elektroforéis kivitele | 51 |
Festési eljárások | 59 |
Kisfeszültségű papír-elektroforézises fehérjevizsgálat eredményének értékelése | 65 |
A kisfeszültségű papír-elektroforézises módszer néhány hibaforrása | 71 |
B) Cellulózmembrán-elektroforézis | 72 |
C) Keményítőgél-elektroforézis | 75 |
Vertikális keményítőgél-elektroforézis | 75 |
Horizontális keményítőgél-elektroforézis | 77 |
D) Agargél-elektroforézis | 80 |
E) Akrilamidgél-elektroforézis | 83 |
Akrilamidgél-zónaelektroforézis | 83 |
"Dise"-elektroforézis | 87 |
F) Preparatív elektroforézises eljárások | 93 |
Folyamatos elektroforézis | 93 |
Preparatív papír-elektroforézis | 96 |
Preparatív keményítőblokk-elektroforézis | 99 |
Fehérjemeghatározások | 101 |
Fehérjemeghatározás Folin - Ciocalteu-fenolreagenssel | 101 |
Makromódszer | 101 |
Makromódszer | 102 |
Fehérjemeghatározás Biuret-reakcióval | 102 |
Fehérjemeghatározás ninhidrin-módszerrel | 103 |
Kvantitatív fehérjemeghatározás amidofeketével | 103 |
Közép- és nagyfeszültségű elektroforetikus módszerek (Írta: Sajgó Mihály) | 107 |
A) A Mikes-féle leszálló papír-elektroforézises | 108 |
B) Középfeszültéség horizontális elektroforézis-berendezés és alkalmazása | 110 |
C) Diagonál-elektroforézis módszere | 121 |
Cisztintartalmú peptidek kinyerése diagonál-elektroforézissel | 121 |
Hisztidinpeptidek izolálása diagonál-módszerrel | 124 |
Lizinpeptidek izolálása diagonál-módszerrel | 125 |
Fehérjék C-terminális paptidjének kinyerése fehérje tripszines hidrolizátumából | 126 |
A nagyfeszültségű elektroforézis technikája | 127 |
D) A nagyfeszültségű elektroforézis technikája | 128 |
Immunokémiai vizsgálómódszerek | 131 |
A) Fehérjevizsgálatok precipitációs reakció segítségével | 131 |
Kvalitatív precipitációs vizsgálat | 131 |
Ellenanyagtiter meghatározása hígításos eljárással | 132 |
Antigén - ellenanyag egyensúlyi (ekvivalencia-) zóna meghatározása | 134 |
Interfaciális (gyűrűs) precipitációs vizsgálat | 134 |
Kvantitatív precipitációs módszer | 135 |
B) Fehérjevizsglatok géldiffúziós módszerekkel | 137 |
Egyszerű, lineáris géldiffúziós módszer | 137 |
Lineáris (egydimenziós) kettős géldiffúzió | 139 |
Kétdimenziós kettős géldiffúzió (Ouchterlony-módszer) | 140 |
Immuno-elektroforézis | 147 |
Fehérjék összehasonlító vizsgálata Ossermann-módszerrel | 158 |
Abszorpció immuno-elektroforézis | 161 |
Immungélszűrés | 162 |
Elektro-syneresis | 163 |
Fehérjék kvalitatív és kvantitatív vizsgálata ellenanyagokat tartalmazó agarózgélben végzett elektroforézis segítségével | 164 |
Kvantitatív géldiffúziós módszerek | 166 |
Fehérjék immunodiffúziós vizsgálata cellulózacetátmembránon | 170 |
Immunsavó-termelés | 171 |
Fehérjék és peptidek hidrolízise | 177 |
A) A vizsgálandó anyag előkészítése hidrolízisre | 177 |
Fehérjék és peptidek perhangyasavas oxidációja | 177 |
Fehérjék és peptidek redukciója és karboximetilezése | 177 |
B) Fehérjék és peptidek hidrolízise 6 N sósavval | 178 |
C) Fehérjék és peptidek részleges savas hidrolízise | 179 |
D) Fehérjék és peptidek hidrolízise trípszinnel | 180 |
E) Fehérjék és peptidek hidrolízise kimotripszinnel | 181 |
F) Fehérjék és peptidek hidrolízise papszinnel | 181 |
G) Fehérjék és peptidek hidrolízise papainnal | 182 |
H) Fehérjék brómciános hasítása | 183 |
Aminosavak kvantitatív meghatározása automatikus aminosav-analizátorral | 185 |
Aminosavak és peptidek papírkromatográfiája | 195 |
Peptidek ioncserélő kromatográfiája | 203 |
A) Erősen savanyú peptidek frakcionálása Amberlite IR4B-oszlopon | 203 |
B) Bázikus peptidek kromatográfiája Amerlite IRC50-oszlopon | 204 |
C) Peptidek frakcionálása Dowex 50x2-oszlopon, nem illékony pufferok alkalmazásában | 205 |
D) Peptidek frakcionálása Dowex 50x2-oszlopon, illékony pufferok alkalmazásával | 207 |
E) Peptidek kromatográfiája CM-cellulóz-oszlopon | 208 |
F) Peptidek kromatográfiája DEAE-cellulóz-oszlopon | 210 |
Fehérjék kromatográfiája | 213 |
A) Fehérjék kromatográfiája anioncserélő cellulóz-oszlopn | 213 |
Fehérjék kromatográfiája OH-ciklusú DEAE-cellulózoszlopon | 213 |
Fehérjék kromatográfiája CI-ciklusú DEAE-cellulózoszlopon | 215 |
DEAE-cellulóz-kromatográfiai ureában | 216 |
Szérumfehéjék kromatográfiája DEAE-cellulóz-oszlopon | 217 |
B) Fehérjék kromatográfiája kationcserélő cellulóz-oszlopon | 220 |
Ferhérjék kromatografálása CM-cellulóz-oszlopon | 220 |
Szérumfehérjék frakcionálása P-cellulóz-oszlopon | 223 |
Szérumfehérjék frakcionálása CM-cellulóz-oszlopon | 223 |
C) Szérumfehérjék frakcionálása DEAE-Sephadex-oszlopon | 224 |
Fehérjék és peptidek gélszűrése | 229 |
A) Fehérjeoldatok sómentesítése Sephadex-oszlopon | 229 |
B) Fehérjeoldatok koncentrálása Sephadexszel | 230 |
C) Szérumfehérjék frakcionálása gélszűréssel | 230 |
D) GammaG-globulin nagy molekulasúlyú hasítási termékeinek szétválasztása Sephadex-oszlopon | 232 |
E) Enzimatikus hidrolizátum előfrakcionálása Sephadex G-50-oszlopon | 233 |
F) Fehérjék szeparálása reciklizáló gélszűréssel | 235 |
Rétegkromatográfia (Írta: Medgyesi György) | 237 |
A) Aminosavak és származékaik rétegkromatográfiája | 241 |
DNP-aminosavak | 242 |
PTH-aminosavak | 243 |
Dansyl-aminosavak | 243 |
Peptidek | 244 |
B) (Vékony)réteg-gélszűrés | 244 |
Fehérjék, pepidek végcsoport-analízise és fokozatos lebontása (Írta: Sajgó Mihály) | 249 |
A) Az N-terminális meghatározása 2,4-dinitro-fluor-benzolos módszerrel | 249 |
Fehérje dinitrofenilezése | 250 |
DNP-fehérje, illetve DNP-peptid hidrolízise és a DNP-származékok extrahálása | 251 |
DNP-aminosavak papírkromatográfiája | 252 |
DNP-aminosavak azonosítása vékonyréteg-kromatográfiával | 256 |
DNP-aminosavak indirekt azonosítása | 256 |
DNP-származékok kvantitatív meghatározása | 258 |
DNP-aminosavak előállítása | 259 |
e-DNP-lizin előállítása | 260 |
B) N-terminális aminosav meghatározása "dansyl" módszerrel | 261 |
A dansylezés technikája | 261 |
DNS-aminosavak azonosítása | 262 |
DNS-aminosavak előállítása | 265 |
C) Az N-terminális szekvencia meghatározása fenil-izo-tiocianátos lebontás segítségével | 266 |
D) Fehérjék PTC-lebontása | 268 |
E) Peptidek szekvenciavizsgálata dansyl - Edman-módszerrel | 269 |
F) Peptidek szekvenciavizsgálata Edman-lebontással és kvantitatív aminosav-analízissel | 270 |
PTH-származékok azonosítása és meghatározása | 271 |
PTH-aminosavak előállítása | 272 |
G) Az N-terminális-szekvencia meghatározása hidrazinolízissel | 273 |
H) A C-terminális aminosav meghatározása hidrazinolízissel | 275 |
I) A C-terminális-szekvencia meghatározása karboxipeptidázemésztés segítéségével | 277 |
Tárgymutató | 281 |